基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分型技术
2019-02-22 10:42:40 来源: 作者:王凤霞 【 】 浏览:1020

MALDI-TOF MS作为一种新兴的软电离质谱,由于其具有快速、准确及高通量等特点,成为一项高效的微生物快速鉴定技术逐渐应用在临床微生物实验室。同时该技术在细菌同源性分析中的应用也逐渐引起医务工作者的关注。MALDI-TOF MS通过分析不同种属微生物保守且独特的蛋白峰进行种内分型,可在十几分钟内对可疑细菌进行同源性分析,为院感工作提供快速的实验室依据。

采用预提取法进行样本制备,将菌株接种于哥伦比亚血琼脂平板,放置于37℃、5%CO2培养箱中培养18h。用一次性取菌环取适量细菌加入1.5ml EP管中,加入300微升纯水混匀,再加入900微升无水乙醇、混匀;高速离心,弃上清,加入50微升70%甲酸混匀,再加入50微升乙腈,混匀,高速离心2分钟。吸取1微升上清液加至质谱仪靶板上,自然晾干,再加入1微升基质液。采用MALDI-TOF MS RUO模式进行样品数据采集和鉴定。质谱仪线性正性模式频率60Hz,采集相对分子质量为2000~20000的蛋白质图谱。每个样品的蛋白图谱在不同位置经过100次激光点击获得,采集的蛋白峰信息经软件校正与仪器内微生物数据库图谱进行比对,得到鉴定结果。将菌株质谱结果导入SARAMIS数据库,进行聚类分析。

PFGE、MLST分型技术相比较,MALDI-TOF MS技术可在十几分钟内快速鉴定病原菌,并完成同源性分析,同时成本较低、通量较高,在临床微生物实验室中更为实用,可满足医院感染工作的需求,及时协助防止医院感染的暴发流行。


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